Clonagem molecular da proteína core do vírus da hepatite c em sistemas de expressão procarionte e eucarionte / Molecular cloning of the hepatitis c virus core protein in procaryionte and eukaryonite expression systems
DOI:
https://doi.org/10.34117/bjdv6n7-658Keywords:
Hepatite C, Proteína Core, Tecnologia do DNA recombinanteAbstract
A maioria dos casos de Hepatite C são assintomáticos e os sintomas aparecem quando a doença já apresenta comprometimento hepático. O presente trabalho objetivou a produção e purificação da proteína Core do vírus da Hepatite C (HCV) em sistema procarionte e sua subclonagem em vetores de expressão eucarionte. A bactéria E. coli foi selecionada para realizar a síntese da proteína de interesse, sendo esta purificada por cromatografia de afinidade e detectada por western blotting. Além disso, a sequência de interesse foi recombinada em plasmídeos para direcionamento a subcompartimentos da célula vegetal, sendo estes confirmados por PCR. Os processos realizados tiveram êxito e a posterior expressão nos diferentes compartimentos celulares possibilitará o melhor rendimento para a produção de imunógenos e viabilizar a produção de kit diagnóstico.
References
ANSALDI, F; ORSI, A.; STICCHI, L.; BRUZZONE, B.; ICARDI, G. Hepatitis C virus in the new
era: perspectives in epidemiology, prevention, diagnostics and predictors of response to therapy. World journal of gastroenterology: WJG, v. 20, n. 29, p. 9633, 2014.
GEISSLER, M; VOLK, J; STEHLE, F; KAYSER, O; WARZECHA, H. Subcellular localization defines modification and production of ? 9-tetrahydrocannabinolic acid synthase in transiently transformed Nicotiana benthamiana. Biotechnology letters, v. 40, n. 6, p. 981-987, 2018.
HUANG, C.; LIN, H.; YANG, X. Industrial production of recombinant therapeutics in Escherichia coli and its recent advancements. Journal of industrial microbiology & biotechnology, v. 39, n. 3, p. 383-399, 2012.
LORCH, M. S.; COLLADO, M. S.; ARGÜELLES, M. H.; ROTA, R. P.; SPINSANTI, L. I.;
LOZANO, M. E.; GOÑI, S. E. Production of recombinant NS1 protein and its possible use in encephalitic flavivirus differential diagnosis. Protein Expression and Purification, 2018.
NAUSCH H, MIKSCHOFSKY H, KOSLOWSKI R, MEYER U, BROER I, HUCKAUF J. High-level
transient expression of ER-targeted human interleukin 6 in Nicotiana benthamiana. PLoS One, v. 7, n. 11, p. e48938, 2012.
TSCHOFEN, M.; KNOPP, D.; HOOD, E.; STOGER, E. Plant molecular farming: much more than medicines. Annual Review of Analytical Chemistry, v. 9, p. 271-294, 2016.
WORLD HEALTH ORGANIZATION et al. Global hepatitis report 2017. World Health Organization, 2017.